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腺相关病毒（AAV）系统质粒 299 促销
腺相关病毒（AAV）系统质粒299
按功能分为 4 大类：包装辅助质粒、血清型衣壳质粒、靶向特殊衣壳质粒、实验目的重组载体（过表达 / 基因编辑 / 神经示踪）。
一、包装辅助质粒（AAV 生产必需三质粒组分）
1. pHelper 质粒
核心元件：腺病毒 Ad5 辅助基因 E2A、E4、VA RNA
功能：提供 AAV 复制、包装所需的辅助因子，无此质粒无法组装成熟病毒颗粒。
2. pAAV-RC 质粒
核心元件：AAV2 Rep 复制基因 + 空衣壳 Cap 阅读框
功能：基础复制元件，需搭配 2/X 型衣壳质粒才能表达对应血清型外壳蛋白。
3. rAAV2-retro helper 质粒
专属逆向示踪辅助质粒，生产逆行示踪 AAV，可从轴突末梢逆向转运至神经元胞体，用于神经环路逆向标记。
二、血清型衣壳质粒（pAAV2/X 系列，决定病毒组织嗜性）
命名规则 pAAV2/X：Rep 基因来自 AAV2，衣壳 Cap 来自 X 型血清型，和 pHelper、目的载体共转 293T 包装病毒。
表格
| 质粒名称 | 衣壳亚型 | 组织靶向优势 |
|---|---|---|
| pAAV2/1 | AAV1 | 骨骼肌、心肌、外周神经 |
| pAAV2/2 | AAV2 | 体外细胞、视网膜、脑局部注射 |
| pAAV2/5 | AAV5 | 肺、胰腺、中枢神经、滑膜 |
| pAAV2/7 | AAV7 | 全身肌肉、肝脏高转染 |
| pAAV2-7M8 | AAV7 突变体 | 肌肉转染效率大幅提升 |
| pAAV2/8 | AAV8 | 肝脏、心肌、眼球，全身静脉递送首选 |
| pAAV2/9n | AAV9 突变型 | 穿透血脑屏障，全身多组织广谱转染 |
| pAAV2/rh10 | AAVrh10 | 中枢神经系统、外周神经、肺 |
pAAV2/1质粒图谱示例
三、特殊靶向衣壳质粒
pUCmini-iCAP-PHP.S
PHP.S 为 AAV9 衍生突变衣壳，外周神经系统特异性靶向，静脉注射优先感染背根神经节、交感神经，极少入脑。
mini 骨架：原核复制元件精简，质粒更小，扩增更稳定。
四、重组目的载体（带 ITR，承载外源基因，实验用病毒骨架）
1. 通用过表达载体
pAAV-CMV-MCS-PGK-EGFP-E2A-Puro
CMV 强启动子驱动目的基因；E2A 自剪切肽共表达 EGFP 荧光 + 嘌呤霉素筛选标记；MCS 多克隆位点插入 CDS；适合体外细胞稳定过表达。
pAAV-EF1a-DIO-mCherry
DIO 双反向开放阅读框（Cre 依赖表达）；仅在 Cre 重组酶阳性细胞表达 mCherry；EF1α 启动子不易沉默，用于神经元亚型特异性标记。
pAAV-EnCMV-mCherry-U6-sgRNA1-sgRNA2
兼具敲除 + 荧光标记：U6 双 sgRNA 同时靶向两个基因；EnCMV 增强型 CMV 驱动 mCherry 示踪感染细胞；CRISPR 敲除示踪一体载体。
2. CRISPR 基因编辑载体
pX601：经典 AAV-Cas9 骨架，RSV 驱动 SpCas9，U6 驱动 sgRNA，单载体完成基因敲除。
pAAV-U6-sgRNA-CMV-GFP：仅表达 sgRNA+GFP 荧光，需搭配 Cas9 表达 AAV 共注射使用。
pAAV-RSV-SpCas9：单独表达 Cas9 蛋白，与 sgRNA 载体配合双载体编辑系统。
3. RNA 干扰载体
pAAV-ZsGreen1-shRNA
U6 启动子表达 shRNA 实现基因沉默；ZsGreen1 绿色荧光标记感染细胞；用于体内外基因下调实验。
4. 神经环路示踪专用载体
AAV-ITR-U6-sgRNA-hSyn-Cre-2A-EGFP-KASH-WPRE-shortPA-ITR
hSyn 神经元特异性启动子，仅在神经元表达 Cre；
KASH 膜定位标签：将 EGFP 锚定在细胞核膜，用于神经元胞体形态清晰标记；
自带 sgRNA 编辑元件，可同步实现基因敲除 + 神经细胞示踪。
补充实操提示 ?
AAV 三质粒包装配比：目的 ITR 载体 : pHelper : pAAV2/X 衣壳 = 1:1:1（质量比）；
容量限制：AAV 两侧 ITR 之间总插入片段≤4.7 kb，过长会大幅降低病毒滴度；
结合你之前 CKAP4-mCherry 需求：
若做动物体内内质网示踪：选用 pAAV-EF1a-DIO-mCherry 骨架改造为 EF1α-CKAP4-(GGS) 3-mCherry；
若做体外细胞过表达筛选：选用 pAAV-CMV-MCS-PGK-EGFP-E2A-Puro 骨架；
神经动物实验优先搭配 AAV2/9n、PHP.S、rh10 衣壳质粒包装。
