选择双萤光素酶报告基因时该如何选择海肾内参载体呢?

通常选择带有组成型表达启动子的海肾萤光素酶表达载体来作为内参，主要包括 pRL 系列和 pGL4 系列中的部分载体。

理论上，内参载体和主报告载体并非一一对应，例如 pGL3 系列载体，既可以选择用 pRL 系列载体作为内参，也可以选择 pGL4 系列海肾萤光素酶表达载体作为内参。不过，不同时期的载体产品表达效率可能会相差较大，使用同一代产品，两者的表达效率相近，更容易调整两种载体共转染比例，这可能是大部分使用者更常见的选择方案。

同一代的不同海肾内参载体之间，最主要的区别是携带的启动子不同，包括 CMV、SV40、TK 等。通常，内参基因表达的活性应当显著的高于背景组，同时，尽量小，确保不干扰主报告基因的表达。所以，我们建议选择内参载体时，首先考虑活性较弱的 TK 启动子驱动的载体（例如 pRL-TK，pGL4.74）。当通过文献资料或者预实验，发现该载体在目标细胞模型中表达效率过低，或者会受到实验研究因素干扰时，再考虑其他表达活性更强的载体（例如 pRL-SV40 或 pGL4.75），或自己构建所需的特殊启动子载体。