pLC5-ciR circRNA表达载体

Propagation in E.coli （1） 克隆菌株：Stbl3、Stbl4 或 Stable。 （2） 原核抗性：Amp+，工作浓度建议为 100ug/ml。 （3） 培养温度：37℃

产品介绍：

第6代 circRNA 表达载体 pLC5-ciR(GFP)含有专利技术的 circRNA 表达框架， 含有精心改造的 Alu 元件、QKI 等 RBP 的结合位点， 并使用全新设计的环化介导序列， 能保证插入的 circRNA 准确高效率环化。表达框架中间预留 EcoRI 和 BamHI 酶切位点，可直接通过酶切连接插入目的 circRNA 片段。本载体能同时表达 GFP 和 Puromycin 抗性基因，可以方便地进行筛选。

产品特点：

 过表达效率高： 专利技术的 circRNA 表达框架能使 circRNA 显著过表达；

 环化准确性高： 特有的环化介导序列能有效保证目的 circRNA 环化无碱基添加或缺失；

 过表达稳定性高： 对 200 nt 到 2500 nt 的 circRNA 都能实现准确高效过表达。

使用说明：

1.  载体准备

载体上 EcoRI 和 BamHI 酶切位点中间加入了一段 45 bp 的 Stuffer， 使用前需先以 EcoRI 和BamHI 对载体双酶切去除 Stuffer 并回收开环空载体， 然后与经双酶切的目的 circRNA 片段进行连接。

2.  克隆引物设计

按照一般的 PCR 引物设计规则设计扩增 circRNA 线性序列的引物，设计好后需在正向引物  5’端加入 EcoRI 酶切位点、正向环化介导序列和AG 受体，反向引物 5’端加入 BamHI 酶切位点、反向环化介导序列和 GT 供体。

5’CGGAATTCTAATACTTTCAG+原引物序列     3’ 5’CGGGATCCAGTTGTTCTTAC+原引物序列     3’

PCR 产物结构如下：

3.  测序鉴定

测序鉴定需在目的 circRNA 片段中部设计两条引物， 双向交叉测序， 两条引物间隔不短于90bp 。若目的 circRNA 序列小于 700bp， 可直接以克隆引物双向测序。

注意事项：

以此载体包装慢病毒应使用 psPAX2、pMD2.G 两个辅助质粒。

常见问题：