AAV-CAG-mCherry 完整解析

一、载体各元件拆分

1. AAV

腺相关病毒（Adeno-Associated Virus），常用基因递送工具：

优势：低免疫原性、可感染分裂 / 非分裂细胞、体内长效表达、生物安全性高；

常用血清型：AAV2、AAV8、AAV9、AAV-DJ、AAVrh10，不同血清型靶向组织不同（AAV9 全身、AAV8 肝脏、AAV2 脑内）。

2. CAG 启动子

广谱强组成型启动子，由三段拼接：

CMV 早期增强子 + 鸡 β- 肌动蛋白启动子 + 兔 β- 珠蛋白内含子

特点：

几乎所有哺乳动物细胞稳定高表达，不受细胞类型限制；

比单纯 CMV 更持久，体内不易沉默；

适合通用示踪、过表达工具，无组织特异性。

3. mCherry

红色荧光报告基因（单体红色荧光蛋白）：

激发波长：587 nm；发射波长：610 nm，红光，背景荧光低；

优势：单体蛋白，不易聚集，毒性远低于 DsRed2；

用途：细胞示踪、病毒转染效率鉴定、共定位标记；

对照用途：空载对照 AAV-CAG-mCherry，排除病毒骨架、注射操作本身对细胞 / 动物的影响。

二、完整载体结构（简化）

ITR（AAV 反向末端重复，复制包装必需）— CAG 启动子 — mCherry — WPRE（增强 mRNA 稳定、提升表达）— hGH polyA（终止转录）— ITR

绝大多数商品化 AAV 会自带 WPRE+polyA，少数简化载体省略 WPRE，表达强度会下降。

三、核心用途

体内细胞示踪

脑、肝脏、心肌、肌肉、视网膜局部注射，标记 AAV 感染到的全部细胞；

实验阴性对照病毒

过表达基因实验组配同骨架、同启动子的 AAV-CAG-mCherry，排除病毒毒性、注射损伤、启动子本身的干扰；

体外感染效率验证

细胞系转染 / 感染后荧光显微镜、流式细胞术检测转染效率；

共定位实验

搭配 GFP、BFP、YFP 等其他荧光工具做多色标记。

四、使用注意事项

血清型选择

中枢神经：AAV2/2、AAV2/9、AAV-DJ；

肝脏：AAV2/8；

全身静脉注射：AAV2/9；

肌肉：AAV2/1。

剂量参考（小鼠）

脑立体定位：1×10⁹ ~ 5×10⁹ vg / 只；

尾静脉全身：1×10¹¹ ~ 3×10¹¹ vg / 只；

肌肉局部：5×10⁹ vg / 块肌肉。

表达时间

CAG 驱动 mCherry：体外 3~5 天可见荧光；体内 7~14 天达到表达峰值，可稳定表达数月。

光谱干扰

mCherry 红光通道和 Cy5、DsRed 通道重合，做免疫荧光染色时注意一抗二抗荧光通道分开。

五、与同类对照病毒对比

表格

载体 特点 适用场景

AAV-CAG-mCherry 广谱强红荧光 通用对照、全身 / 多组织示踪

AAV-CMV-mCherry 短期强表达，体内易沉默 体外细胞实验短期检测

AAV-hSyn-mCherry 神经元特异启动子 仅标记神经细胞

AAV-Alb-mCherry 肝细胞特异 肝脏特异性对照

六、常见衍生改造载体

AAV-CAG-mCherry-2A-GOI：mCherry 与目的基因共表达（2A 自剪切肽，两种蛋白独立）；

AAV-CAG-FLEX-mCherry：Cre 依赖型，仅 Cre 阳性细胞发光，条件性示踪；

AAV-CAG-mCherry-shRNA：同时带荧光标记与干扰序列，方便观察敲低阳性细胞。