CN
| 产品货号 | 产品类型 | 装载载体 | 基因信息 | 产品价格 | 出货周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| HG-PC060 | AAV | pAAV-hSyn-GFP | pAAV-hSyn-GFP | 询价 | 现货 |
AAV-Syn-GFP（pAAV-hSyn-GFP）质粒完整介绍
一、质粒基础定义
AAV-Syn-GFP 是神经科学专用 AAV 转移质粒，全称 pAAV-hSyn-EGFP /pAAV-Syn-GFP；核心功能：人源 Synapsin I（hSyn/Syn）神经元特异性启动子驱动绿色荧光蛋白 GFP 在成熟神经元中特异性表达，是中枢神经示踪、神经元标记最经典对照工具质粒。
pAAV-Syn-GFP质粒图谱
1. 命名释义
AAV：腺相关病毒转移载体骨架，两端含 AAV2 ITR 反向末端重复序列（病毒包装必需顺式元件）
Syn = hSyn / hSyn1：人突触蛋白 1 启动子，神经元特异性调控元件
GFP/EGFP：增强型绿色荧光报告基因，用于荧光成像示踪
二、质粒核心元件（ITR 之间包装区）
标准经典元件顺序：
5’-AAV2 ITR — hSyn启动子 — GFP/EGFP — WPRE — polyA — AAV2 ITR-3’
AAV2 ITR（两端）
AAV 复制、包装、基因组整合必需；仅 ITR 内部序列会被包装进成熟 AAV 病毒颗粒，质粒其余细菌骨架不会进入病毒。
hSyn（Synapsin I）启动子【核心特色】
来源：人 SYN1 基因内源启动子，仅在成熟有丝分裂后神经元激活转录
特异性：只在 NeuN 阳性神经元表达，星形胶质、小胶质、少突胶质、外周体细胞几乎无表达，优于 CMV/CAG 广谱启动子（广谱启动子会污染胶质细胞信号）
优势：片段短小、表达稳定、无细胞毒性，适合大脑全脑、局部脑区、外周神经示踪
GFP/EGFP 报告基因
720 bp 绿色荧光蛋白，激发 488 nm、发射 509 nm；用于神经元胞体、树突、轴突、神经环路可视化，作为空白对照、病毒转染效率标记。
WPRE（土拨鼠肝炎病毒调控元件）
增强 mRNA 稳定性，大幅提升神经元内 GFP 荧光亮度，脑组织成像必备元件。
polyA 多聚腺苷酸化信号（hGH/SV40）
终止转录、稳定 mRNA，保证持续稳定荧光表达。
三、细菌骨架元件（质粒扩增用，不包装入病毒）
Ampᵣ 氨苄青霉素抗性：大肠杆菌筛选标记（工作浓度 100 μg/mL）
pBR322 复制原点（ori）：低拷贝质粒，推荐Stbl3 菌株 30℃扩增，避免 ITR 同源重组缺失；不建议 DH5α 长期传代
f1 单链复制原点（部分载体）：用于测序、点突变构建
三、质粒关键理化参数（以 Addgene #58867 经典版为例）
总质粒长度：~6.4 kb
病毒包装基因组（ITR 区间）：~2.1 kb（远低于 AAV 包装上限 4.7 kb，包装效率极高，可兼容插入其他功能基因）
筛选抗生素：氨苄青霉素（Ampicillin）
克隆酶切位点：BamHI（上游）+ EcoRI（下游），可替换 GFP 为 ChR2、GCaMP、Cre、shRNA 等工具基因
拷贝数：低拷贝，扩增温度 30℃防止 ITR 缺失
四、核心特点
1. 细胞靶向唯一性
仅标记成熟神经元，无胶质细胞杂信号，解决广谱启动子（CMV/CAG）脑内非特异表达干扰，适合单神经元形态、环路投射精细成像。
AAV-Syn-GFP小鼠脑组织荧光染色
2. AAV 包装兼容性强
插入片段短，所有血清型（AAV2/5/9/PHP.B/Retro 等）包装滴度高；
AAV9/PHP.B：静脉注射跨血脑屏障，全脑神经元标记
AAV2-Retro：逆行示踪，标记上游输入神经元
AAV1：顺行跨突触环路示踪
3. 实验用途广谱
空白对照病毒：光遗传、钙成像、过表达 / 敲低实验阴性对照，排除病毒本身毒性
神经元形态示踪：脑区原位注射标记神经元胞体、轴突、树突，3D 重构神经网络
神经环路追踪：结合不同血清型顺行 / 逆行标记上下游投射
外周神经标记：肠神经、背根神经节、交感神经元特异性荧光标记
体外原代神经元培养：原代海马 / 皮层神经元转染，观察神经元发育、突触形态
基因递送效率验证：判断脑区注射、静脉给药的转导范围
五、与其他常用 AAV 启动子对比
表格
| 启动子 | 表达细胞 | 适用场景 | 缺点 |
|---|---|---|---|
| hSyn（Syn） | 仅成熟神经元 | 神经示踪、环路、神经元功能实验 | 不表达于胶质、干细胞 |
| CMV/CAG | 神经元 + 星形胶质 + 体外多种细胞 | 体外细胞、广谱过表达 | 脑内胶质杂信号，干扰神经成像 |
| GFAP | 星形胶质细胞 | 胶质细胞研究 | 完全不标记神经元 |
| CD68 | 小胶质细胞 | 免疫炎症研究 | 无神经元表达 |
六、AAV 病毒包装操作要点
三质粒共转染系统
pAAV-Syn-GFP（转移质粒）+ pRC-R2/Cap（Rep/Cap 包装质粒）+ pHelper（腺病毒辅助质粒），转染 HEK293 细胞；
细胞裂解、氯化铯 / PEG 浓缩纯化，获得完整 AAV 病毒；
动物给药：脑立体定位注射、尾静脉（AAV-PHP.B/9）、眶后注射（外周神经）；
表达周期：小鼠脑内注射后 14–28 天荧光达到峰值，可稳定表达数月。
七、局限与注意事项
仅成熟神经元表达：胚胎 / 新生未成熟神经元、神经干细胞无荧光；
外周组织极低泄漏：高剂量全身给药肝脏少量微弱表达，不影响中枢实验；
质粒扩增必须低温（30℃ Stbl3），高温易发生 ITR 序列缺失，丧失包装能力；
GFP 荧光强度弱于 tdTomato/mCherry，多色成像时优先搭配红光荧光标记。
八、衍生改造载体
基于本骨架可直接替换 GFP，衍生热门工具质粒：
AAV-Syn-Cre-GFP：神经元特异性 Cre 重组酶工具
AAV-Syn-GCaMP6s：神经元钙成像探针
AAV-Syn-ChR2-GFP：光遗传激活工具
AAV-Syn-shRNA-GFP：神经元特异性基因敲低载体
