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| 产品货号 | 产品类型 | 装载载体 | 基因信息 | 产品价格 | 出货周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| HG-PC060 | AAV | AAV-CMV-GFP | AAV-CMV-GFP：CMV 启动子，短期强表达，体内易沉默； | 299 | 现货 |
AAV-CMV-GFP 质粒完整介绍
一、载体基础定义
AAV-CMV-GFP 是腺相关病毒转移质粒（Transfer Plasmid），属于重组 AAV 包装三质粒系统核心载体，用于包装携带绿色荧光报告基因的 AAV 病毒；CMV 广谱强启动子持续驱动 GFP（常用 EGFP 增强型绿色荧光蛋白）表达，是体内外基因递送最通用的荧光对照工具质粒。
AAV-CMV-GFP质粒图谱
1. 完整质粒骨架结构（分两大模块）
（1）AAV 病毒表达盒（ITR 之间，可包装进病毒基因组）
ITR 反向末端重复序列（AAV2 型）
唯一顺式作用元件，负责病毒复制、包装、核内游离留存；左右各 1 个，两段 ITR 之间为可插入外源基因的包装区；ssAAV 单链 AAV 总包装容量上限约 4.7 kb，scAAV 自互补型仅 2.5 kb 左右。
CMV IE 人巨细胞病毒立即早期启动子
广谱组成型强启动子，绝大多数哺乳动物细胞（神经、肌肉、肝脏、免疫细胞等）高表达；体外细胞表达强度高于 EF1α、SV40；缺点：体内长期（1–3 个月）易发生表观沉默，干细胞、原代神经元沉默更明显。
GFP / EGFP 绿色荧光报告基因
激发 488 nm、发射 509 nm 荧光，直接荧光显微镜 / 流式细胞仪可视化；用于标记转导细胞、定量感染效率、示踪细胞分布；无细胞毒性，阴性对照标配。
PolyA 终止信号（bGH / SV40 polyA）
终止 mRNA 转录，提升 GFP mRNA 稳定性，增强荧光信号。
（2）大肠杆菌扩增骨架（ITR 外侧，不进入 AAV 病毒颗粒）
AmpR 氨苄青霉素抗性基因：原核筛选标记，LB 氨苄平板扩增质粒
ColE1 复制原点 ori：大肠杆菌高拷贝复制，大量提质粒用于病毒包装
多克隆酶切位点：可切除 CMV-GFP，替换目的基因构建功能型 AAV 载体
二、核心元件功能拆解
1. AAV 骨架（pAAV backbone）
缺失野生 AAV 的 Rep/Cap 复制、衣壳蛋白基因，复制缺陷、无致病性；包装时需共转 Rep/Cap 质粒 + 辅助质粒提供反式蛋白；
病毒进入细胞后以游离环状 DNA 存在于细胞核，极少整合基因组，体内长期稳定表达（数月～数年），致癌风险极低。
2. CMV 启动子特点
✅ 优势：
广谱无细胞特异性，体外所有细胞株高表达；
瞬时表达峰值高，短周期体外实验首选；
小胶质细胞、肿瘤细胞中表达显著优于 CBA、PGK 等通用启动子。
❌ 局限：
体内长期表达沉默（甲基化修饰）；
胚胎干细胞、部分原代细胞活性弱；
强过表达可能造成细胞应激、毒性干扰表型。
3. GFP 报告基因作用
体外：转染 / 感染阳性细胞快速鉴定、流式定量转导效率；
体内：组织切片荧光成像，标记 AAV 靶向组织、细胞分布；
实验对照：作为空白对照，排除病毒注射、转染操作本身的生理影响。
三、质粒基础理化参数（通用 Addgene #67634 标准株）
总质粒全长：~6940 bp
原核筛选：Ampicillin 100 μg/mL
推荐宿主菌：NEB Stable（稳定 ITR，防止序列缺失）
包装类型：ssAAV（单链常规型）；另有 scAAV-CMV-GFP 自互补版本，转导速度更快、无需宿主 DNA 合成，适合不分裂细胞（神经元、心肌）
可包装血清型：AAV1/2/5/6/8/9/DJ/Rh10 等，衣壳决定组织靶向，CMV 仅调控表达强度，不改变细胞嗜性
四、标准实验用途
AAV 包装阴性对照
功能基因 AAV 配套对照，排除病毒、注射、转染带来的非特异性表型。
细胞 / 组织示踪标记
脑、肝脏、肌肉、视网膜、肿瘤原位注射，荧光示踪靶细胞群体。
转导效率标定
体外细胞预实验，筛选最优 MOI、感染时间、血清型；体内摸索注射剂量、给药途径。
启动子 / 血清型筛选工具
快速验证不同 AAV 衣壳在目标组织的靶向能力。
体外细胞转染对照
单独转染质粒，验证转染试剂效率。
五、优缺点总结
优点
生物安全性极高：AAV 无致病性、低免疫原性、低基因组整合风险；
表达广谱、信号强：CMV 驱动荧光亮度高，成像无需抗体染色；
兼容体内 / 体外、分裂 / 不分裂细胞（神经元、心肌细胞均可转导）；
操作通用：三质粒包装体系成熟，商业化病毒包装平台通用；
可视化直观：活细胞实时荧光观察，无需固定染色。
缺点
CMV 体内长期表达易沉默，长期动物实验推荐 EF1α/CAG 替代；
ssAAV 包装容量有限，若同时携带大片段目的基因会受限；
GFP 荧光穿透弱，深部组织活体成像信号不足（可换 mCherry、iRFP 近红外荧光）；
强 CMV 过表达可能轻微干扰细胞生理，表型实验需设置严格对照。
六、AAV 病毒包装流程（配套质粒系统）
生产 AAV-CMV-GFP 病毒需要三质粒共转染 293T 细胞：
pAAV-CMV-GFP（转移质粒，携带目的表达盒）
pRep/Cap（提供 AAV 复制蛋白 Rep、衣壳蛋白 Cap，决定血清型）
pHelper（提供腺病毒辅助基因 E2A/E4/VA，支撑病毒复制组装）
转染后 72 h 收集细胞，裂解、纯化、浓缩得到高滴度 AAV 病毒，用于细胞感染或动物体内注射。
七、常见衍生变体
scAAV-CMV-GFP：自互补 AAV，转导效率提升 10–100 倍，适合神经元、原代细胞；
AAV-CMV-EGFP：增强型 GFP，荧光亮度更高、光稳定性更强；
AAV-CMV-ZsGreen：亮绿色荧光，体内成像信噪比优于普通 GFP；
AAV-CMV-GFP-2A-XX：2A 肽连接 GFP 与功能基因，共表达标记 + 目的蛋白
