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| 产品货号 | 产品类型 | 装载载体 | 基因信息 | 产品价格 | 出货周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| C970N917G0 | mGreenLantern荧光质粒 | pET-28a | pET-28a-mGreenLantern | 480 | 现货 |
pET-28a(+)-mGreenLantern 是大肠杆菌原核诱导表达质粒
pET-28a (+)-mGreenLantern 载体完整介绍
一、载体概述
pET-28a(+)-mGreenLantern 是大肠杆菌原核诱导表达质粒：骨架为经典 Novagen pET-28a(+)，多克隆位点内插入单体绿色荧光蛋白 mGreenLantern（mGL） 编码序列；用于IPTG 诱导表达 His 标签融合 mGreenLantern 荧光蛋白，可作为原核报告基因、荧光标记蛋白、蛋白折叠 / 表达示踪工具。
基础参数
载体骨架：pET-28a (+)，空载长度 5369 bp
抗性标记：卡那霉素 Kanᵣ（50 μg/mL）
表达启动子：T7/lac 启动子（IPTG 诱导）
表达宿主：克隆菌株 DH5α；表达菌株 BL21(DE3) / BL21(DE3)pLysS
融合标签：N 端 6×His-tag + T7-tag + 凝血酶 Thrombin 酶切位点；部分构建版本 mGL 下游还带有 C 端 His 标签，方便 Ni-NTA 纯化
调控元件：lacI 阻遏蛋白、T7 终止子、pBR322 复制子
插入基因：mGreenLantern（mGL），2020 年 PNAS 发表的新一代单体绿色荧光蛋白
二、mGreenLantern 荧光蛋白核心理化特性（重点对比 EGFP）
表格
| 参数 | mGreenLantern | EGFP |
|---|---|---|
| 激发峰 / 发射峰 | 503 nm / 514 nm | 488 nm / 509 nm |
| 摩尔消光系数 ε | 101 mM⁻¹·cm⁻¹ | 55 |
| 量子产率 Φ | 0.72 | 0.60 |
| 理论分子亮度 (ε×Φ) | 72.7 | 33 |
| pKa | 5.6（耐酸性更强） | 6.0 |
| 聚合状态 | 真正单体 monomer | 弱二聚倾向 |
| 405 nm 吸收峰 | ✅无（避免紫外串激发干扰） | ❌存在 405 nm 吸收 |
| 细胞内表现 | 折叠效率极高，胞内亮度最高可达 EGFP 6 倍，成熟速度快 | 成熟较慢 |
✅ 优势小结：
兼容常规 GFP 滤片组、488/491 nm 激光器；商用 EGFP 抗体可交叉识别；
酸性环境荧光更稳定，适合酸性细胞器模拟、细菌胞内酸化实验；
无 405 nm 激发干扰，适合多色成像（搭配 T-Sapphire 等蓝激发荧光蛋白）；
⚠️ 短板：光稳定性弱于 sfGFP、mNeonGreen，长时间激光共聚焦活细胞拍摄需要注意漂白。
三、载体典型结构（转录阅读框）
plaintext
T7 Promoter → RBS → 6×His → Thrombin酶切位点 → T7-tag → MCS → mGreenLantern → T7 Terminator
常规构建方式：mGreenLantern 通过NcoI/XhoI、BamHI/XhoI等酶切插入 MCS；
你可在mGL 上游 / 下游插入目的基因，构建N 端融合 / C 端融合荧光标记载体，追踪重组蛋白在大肠杆菌内表达、可溶性、亚细胞定位。
四、主要用途
1）基础应用
原核荧光报告系统：启动子活性表征、菌株筛选阳性转化子（菌落荧光可视化）；
荧光蛋白体外表达纯化：诱导表达→Ni 柱纯化获得高纯 mGreenLantern 蛋白，用于体外荧光标准品、FRET 供体；
大肠杆菌蛋白示踪：目的蛋白与 mGL 融合，观察蛋白可溶性、包涵体形成、细胞内分布。
2）进阶应用
细菌荧光显微成像、流式细胞仪检测菌体荧光强度；
蛋白折叠筛选：mGL 荧光强度间接反映融合蛋白折叠水平；
可替换传统 pET-EGFP 载体，获得更强荧光信号，低表达菌株也能轻松检测。
五、标准表达方案参考
转化 BL21 (DE3)，LB+Kan 50 μg/mL，37 ℃培养；
OD₆₀₀ ≈ 0.6–0.8 加入 IPTG（0.1–1 mM）；
诱导条件二选一：
快速诱导：37 ℃ 3–4 h（适合可溶性高表达）
低温慢诱导：16–22 ℃ 16–20 h（减少包涵体，提升折叠与荧光）
检测：荧光显微镜 / 酶标仪（Ex 503 nm / Em 514 nm）；纯化使用 Ni-NTA 亲和层析，凝血酶可切除 N 端 His 标签。
六、与同类 pET 荧光载体对比
pET-28a-mGreenLantern VS pET-28a-EGFP
mGL 亮度更高、耐酸、单体性质更好；适合弱启动子、低表达体系；缺点光漂白更快。
VS pET-28a-mNeonGreen
mNeonGreen 分子亮度更高，但 pKa 更高、酸性条件易淬灭；mGreenLantern 酸化环境更稳定。
VS pET-28a-sfGFP
sfGFP 光稳定性最强；mGL 胞内折叠效率整体更优秀。
七、注意事项
mGreenLantern基因序列密码子：优先选用大肠杆菌优化密码子版本；原始人源优化序列直接在 E.coli 表达亮度会下降；
融合构建：尽量在融合接头加入柔性 linker（GGSGG），避免空间位阻影响 mGL 发色团成熟；
成像：不要长时间高强度激光照射，容易快速光漂白；
菌株：严禁使用不含 DE3 溶原菌（如 DH5α 不能用于表达，仅用于质粒扩增）。
