AAV-CAG-GFP  介绍

一、载体名称

1. AAV：腺相关病毒（Adeno-Associated Virus），安全、低免疫原性、适合体内外基因递送，常用体内示踪工具；

2. CAG：强复合型启动子，由CMV 早期增强子 + 鸡 β- 肌动蛋白启动子 + 兔 β 珠蛋白内含子组成；

3. GFP：绿色荧光蛋白，报告基因，荧光直接标记被感染细胞，用于可视化示踪。

完整含义

AAV 病毒载体，使用 CAG 广谱强启动子驱动绿色荧光蛋白表达。

二、核心元件功能

1. CAG 启动子（最大优势）

• 广谱表达：几乎所有哺乳动物细胞（神经元、心肌、肝细胞、成纤维细胞、免疫细胞等）均可高效转录；

• 表达强度远高于普通 CMV，体内长期表达不易沉默；

• 适合需要强、稳定、广谱荧光标记的动物实验。

对比：CMV 体内长期表达易下调，CAG 更适合活体长期示踪。

2. GFP 报告基因

• 激发波长～488 nm，发射～509 nm，共聚焦 / 荧光显微镜、流式、活体成像均可检测；

• 仅在 AAV 感染成功的细胞内发光，直观判断病毒转染效率、感染范围。

3. AAV 骨架优势

• 不整合基因组，插入突变风险极低，动物体内安全性高；

• 可包装不同血清型（AAV1/2/5/8/9/rh10 等），靶向不同组织：

• AAV2：体外细胞、脑局部注射；

• AAV9：全身静脉注射，靶向心脏、肝脏、骨骼肌；

• AAV8：肝脏高亲和；

• AAV1：肌肉、外周神经。

三、常用实验用途

1. 组织细胞示踪

   脑、肝脏、心脏、肌肉局部注射，标记靶组织全部被感染细胞，观察细胞形态、分布。

2. AAV 血清型效率验证

   同启动子 GFP，仅改变血清型，对比不同组织感染能力。

3. 注射剂量 / 给药方式摸索

   梯度病毒量注射，通过荧光强弱确定最优滴度。

4. 空白对照病毒

   做基因过表达 / 敲减实验时，AAV-CAG-GFP是标准阴性对照，排除病毒本身、注射操作带来的非特异性效应。

四、典型载体结构（顺式元件）

ITR（AAV 反向末端重复序列）— CAG 启动子 — GFP — PolyA（多聚腺苷酸化终止信号）— ITR

• ITR：病毒复制、包装必需；

• PolyA：稳定 mRNA，提升 GFP 表达量。

五、与其他荧光对照载体区分

• AAV-CMV-GFP：CMV 启动子，短期强表达，体内易沉默；

• AAV-Syn-GFP：神经元特异性启动子，只标记神经细胞；

• AAV-CAG-mCherry：红色荧光，适合多色共标实验。

六、实验注意要点

1. 滴度：体内动物实验常用包装滴度 ≥1×10¹² vg/mL；

2. 表达时间：CAG 驱动 GFP，体外 3–5 天可见荧光，体内 7–14 天达到峰值，可稳定表达数月；

3. 荧光淬灭：组织切片建议抗荧光淬灭封片剂；活体成像需设置阴性对照排除自体荧光。