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| 产品货号 | 产品类型 | 装载载体 | 基因信息 | 产品价格 | 出货周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| #255915 | mCherry-Paxillin (Plasmid #255915) | mCherry-Paxillin
(Plasmid #255915) | 680 |
mCherry-Paxillin
(Plasmid #255915)
mCherry‑Paxillin（Addgene Plasmid #255915）Addgene
一、核心基础信息
载体全称：mCherry‑Paxillin
Addgene 编号：#255915
** depositing 实验室 **：Takanari Inoue 实验室
配套系统：专门适配 optoTAT 光遗传系统（opto‑TAT system）；用于黏着斑（focal adhesion）动态成像、细胞黏附与细胞迁移研究Addgene。
发表文献：Deb Roy, et al. Journal of Cell Biology, 2026（e202508095）Addgene。
载体骨架与培养条件
Backbone：pTriEx‑4（Novagen），可在哺乳动物细胞、杆状病毒体系表达Addgene。
原核抗性：氨苄青霉素 Ampicillin（100 μg/mL）；大肠杆菌推荐菌株 DH5α；37 ℃培养。
表达模式：mCherry‑Paxillin 融合蛋白，mCherry 为 N 端红色荧光标签（激发 587 nm，发射 610 nm），Paxillin（桩蛋白）定位于黏着斑，用来可视化黏着斑组装、解聚动态变化。
质粒图谱#255915
二、质粒关键参数整理
表格
| 项目 | 详情 |
|---|---|
| 载体类型 | 哺乳动物细胞表达载体（Mammalian Expression） |
| 融合形式 | N‑terminal mCherry‑Paxillin |
| 适用研究方向 | 光遗传学调控黏着斑、细胞迁移、FA 动力学、opto‑TAT 下游效应观察Addgene |
| 购买权限 | 仅限学术机构与非营利组织；企业不可采购；售价 94 美元Addgene |
| 可用文件 | Addgene 提供质粒图谱、全序列文件（FASTA 格式可下载） |
三、和普通 mCherry‑Paxillin（#55115、#80029）区别
#55115 / #80029：CMV 强启动子，常规广谱表达，用于普通荧光观察；
#255915：基于 pTriEx‑4 骨架，为 opto‑TAT 光遗传体系定制化构建，用来配合光控 TAT‑蛋白入核，观察下游 Paxillin 介导的黏着斑重塑，不能简单拿来做普通过表达实验Addgene。
四、常规分子实验要点
测序引物：可选用 pTriEx‑4 载体通用引物 T7‑Forward、BGH‑Reverse；
酶切位点：载体 MCS 含 NheI、BglII、XhoI、EcoRI 等常用酶切位点；
细胞转染：Lipofectamine‑3000 转染 HeLa、NIH3T3、MEF 等细胞；共转 opto‑TAT 质粒后用光刺激观察黏着斑变化；
成像：共聚焦显微镜、TIRF 显微镜（TIRF 非常适合黏着斑成像）观察 mCherry 红色荧光信号。
如果你需要：
质粒 FASTA 序列、GenBank (.gb) 文件；
酶切位点分析、引物设计、载体改造方案，我可以帮你导出序列并分析。
. Plasmid #55115：mCherry‑Paxillin‑KM‑N‑18Addgene
构建来源：Michael Davidson 实验室（荧光蛋白标杆实验室）
载体骨架：mCherry‑N‑18（Clontech 经典 mCherry‑N1 改造版本）
融合方式：N 端 mCherry‑人源 Paxillin；mCherry 在蛋白 N 端；激发 587 nm，发射 610 nm。
启动子：CMV‑IE 强启动子；广谱哺乳动物细胞表达。
抗性筛选：
原核：Kanamycin（卡那霉素 50 μg/mL）；DH5α 扩增；高拷贝质粒
真核：G418（Neomycin）筛选稳转株
用途定位：常规黏着斑（Focal‑Adhesion）荧光示踪；TIRF 显微镜观察 FA 组装‑解聚、细胞迁移；普通细胞成像，不是为光遗传体系设计。
缺点：Addgene 没有提供全长序列，只提供部分测序片段；文献引用量极高，细胞生物学经典黏着斑报告质粒。
2. Plasmid #80029：pmCherry‑PaxillinAddgene
构建来源：Chinten James Lim 实验室
载体骨架：pmCherry‑C1 骨架；CMV 启动子；全长序列 Addgene 可下载（gb 文件）。
插入基因：小鼠来源 Paxillin（Pxn），区别 #55115 的人源 PXN；N‑端 mCherry 标签。
抗性：原核卡那霉素 Kan 50 μg/mL；真核 Zeocin 筛选。
测序引物：上游 mCherry‑F；下游 BGH‑Rev；载体序列完整方便后续载体改造。
适用场景：小鼠来源细胞（NIH‑3T3、MEF 等）优先选 #80029；人源细胞优先 #55115。
3. 3 个质粒横向对比（#55115、#80029、#255915）
表格
| Addgene 编号 | Paxillin 来源 | 骨架载体 | 原核抗性 | 核心用途 |
|---|---|---|---|---|
| #55115 | Human 人源 | mCherry‑N‑18 | Kanamycin | 人源细胞常规 FA 成像（最经典）Addgene |
| #80029 | Mouse 小鼠 | pmCherry‑C1 | Kanamycin | 小鼠细胞黏着斑观察；序列完整可改造Addgene |
| #255915（之前的质粒） | Human 人源 | pTriEx‑4 | Ampicillin | 专门配合 opto‑TAT 光遗传系统，不适合普通过表达Addgene |
实验选择建议
普通 TIRF 观察 HeLa、MDA‑MB‑231 等人类细胞：优先选 **#55115**；
NIH‑3T3、小鼠原代细胞：选 **#80029**；
做 opto‑TAT 光控实验：只能用 #255915，#55115 和 #80029 不匹配该体系。
