HG-VRW0575

pWB980 枯草芽孢杆菌分泌表达载体

pWB980质粒图谱

一、基础参数

1. 骨架来源：源自 pUB110，枯草杆菌专用表达载体（非原生穿梭载体，需改造 ori 才能在大肠杆菌复制）

2. 全长：3787 bp

3. 筛选标记：卡那霉素抗性 kan，枯草筛选终浓度 25 μg/mL；自带 bleo 抗性（商用版本常删除）

4. 拷贝数：枯草中约 134 拷贝 / 细胞，质粒稳定性极高，连续传代不易丢失

5. 培养条件：37℃，LB 液体 / 固体培养基；提质粒需加溶菌酶裂解芽孢杆菌细胞壁

二、核心表达元件（分泌表达核心）

1. P43 组成型强启动子

   枯草杆菌经典强持续启动子，无需诱导，对数期 / 稳定期均高效转录外源基因，是工业酶表达首选启动子。

2. sacB 果聚糖蔗糖酶信号肽（SacB SP）

   位于 MCS 上游，引导翻译后的重组蛋白分泌至胞外培养基，实现胞外分泌表达，省去破碎菌体步骤。

3. 多克隆位点 MCS（单一酶切位点）

   NheI、HindIII、XhoI、XmaI、BamHI、SphI、SacI 等，方便外源基因定向插入信号肽下游。

三、载体用途

1. 枯草芽孢杆菌（WB800、168 等菌株）胞外分泌表达蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素酶等工业酶；

2. 异源蛋白分泌、胞外酶活检测、启动子 / 信号肽功能验证；

3. 适合食品级安全宿主枯草杆菌，用于发酵工程、酶制剂开发。

四、优缺点

优势

• 强组成型 P43 + 高效 SacB 信号肽，胞外分泌量大；

• 质粒拷贝数高、遗传稳定性强，发酵传代不易丢失；

• 载体总长度小（3.8k），可容纳大片段外源基因；

• 枯草无内毒素，产物安全，适合食品 / 医药用酶。

局限

1. 野生型 pWB980无大肠杆菌复制子，不能直接在 DH5α 等 E.coli 扩增，亚克隆不便；

2. 解决方案：购买改造版 pWB980-ori / pUC980（添加 pUC ori，成为大肠杆菌 - 枯草穿梭载体）；

3. 枯草提质粒效率低，必须添加溶菌酶预处理。

五、常用改造衍生载体

1. pWB980-DB：删除 bleo 抗性基因，拷贝数不变，载体更小；

2. pUC980 系列：插入大肠杆菌 pUC 复制起点，双宿主穿梭，拷贝提升至 450+，亚克隆更便捷；

3. pWB980 自带信号肽突变体：优化 SacB SP，进一步提升分泌效率。

4.