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| 产品货号 | 产品类型 | 装载载体 | 基因信息 | 产品价格 | 出货周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| 331 | 广宿主、组成型强表达 mCherry 红色荧光蛋白的原核表达质粒 | pBBR1MCS2-Tac-mcherry | pBBR1MCS2-Tac-mcherry测试过有红色荧光 | 300 | 现货 |
pBBR1MCS2-Tac-mcherry测试过有红色荧光
别名: | 测试过有红色荧光 |
启动子: | Tac |
复制子: | pBBR1 |
终止子: | T7 terminator |
质粒分类: | 红色荧光蛋白表达质粒；广宿主质粒 |
质粒大小: | 6195bp |
质粒标签: | mCherry |
原核抗性: | Kan |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37度 |
表达宿主: | 革兰氏阴性菌 |
| 5'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
3'测序引物: | M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT |
■ 质粒属性
质粒宿主: | 广宿主 |
质粒用途: | 蛋白表达 |
片段类型: | ORF |
片段物种: | |
原核抗性: | Kan |
真核抗性: | |
荧光标记: | 红色 |
pBBR1MCS2‑Tac‑mCherry 介绍
pBBR1MCS2‑Tac‑mCherry 是一个广宿主、组成型强表达 mCherry 红色荧光蛋白的原核表达质粒，常用于革兰氏阴性菌（大肠杆菌、假单胞菌、根瘤菌、农杆菌等）的荧光标记、示踪与报告基因实验。
一、基本信息
全称：pBBR1MCS2‑Tac‑mCherry
大小：约 6195–6199 bp
骨架：pBBR1MCS2（广宿主载体）
启动子：Tac 强启动子（lac 与 trp 融合，组成型 / 强诱导）
报告基因：mCherry（单体红色荧光蛋白）
抗性标记：卡那霉素（Kanamycin, Kanᵣ）
复制子：pBBR1 oriV + Rep（广宿主、中高拷贝）
终止子：T7 terminator
宿主范围：几乎所有革兰氏阴性菌；常用：E. coli DH5α、BL21、假单胞菌、农杆菌等
测序引物：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：CAGGAAACAGCTATGACC
二、关键元件逐一解析
1. 骨架 pBBR1MCS2（广宿主载体）
来源：由 pBBR1 质粒改造，5.1 kb 左右，结构紧凑。
核心优势：
广宿主：可在大肠杆菌、假单胞菌、根瘤菌、农杆菌等多种革兰氏阴性菌中稳定复制。
高拷贝：在大肠杆菌中为中高拷贝，易提取、产量高。
多克隆位点（MCS）：含丰富单一酶切位点，便于插入外源基因。
卡那霉素抗性：筛选标记明确，背景低。
2. Tac 启动子（强启动子）
结构：lac 启动子 −10 区 + trp 启动子 −35 区融合的杂合启动子。
特性：
强度高：比 lac 强约 10 倍，接近 trp，组成型强表达（IPTG 可进一步诱导）。
调控简单：受 lacI 抑制，无 IPTG 时本底低，加 IPTG 后强烈诱导。
作用：驱动下游 mCherry 高效转录。
3. mCherry（单体红色荧光蛋白）
来源：珊瑚 Discosoma sp. 的 DsRed 经多轮定向进化而来，单体、快成熟、高亮度、光稳定性好。
关键参数：
激发峰：587 nm
发射峰：610 nm（红色）
分子量：26.7 kDa
成熟时间：~15 min（快）
单体：是（避免多聚体干扰，适合融合蛋白）
用途：活细胞荧光标记、示踪、定位、报告基因；红色荧光背景低、穿透深，适合体内成像。
4. 抗性与筛选
卡那霉素抗性基因（Kanᵣ）：编码氨基糖苷磷酸转移酶，50 μg/mL 卡那霉素可有效筛选阳性转化子。
5. 复制子（pBBR1 oriV + Rep）
复制方式：松弛型，不依赖宿主复制，多拷贝。
宿主兼容性：极广，几乎所有革兰氏阴性菌均可复制，是微生物学中最常用的广宿主载体骨架之一。
三、质粒结构与酶切位点（简化）
plaintext
pBBR1MCS2 backbone (5.1 kb)
├─ Kanᵣ (卡那霉素抗性)
├─ pBBR1 oriV + Rep (复制区)
├─ Tac promoter (强启动子)
├─ mCherry (711 bp, 红色荧光蛋白)
└─ T7 terminator (终止子)
常用酶切位点：BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、XhoⅠ 等（位于 MCS 区）。
四、主要用途
细菌荧光标记：将质粒转入目标菌，稳定表达 mCherry，红色荧光肉眼 / 荧光显微镜可见，用于菌落、细胞、生物膜示踪。
启动子活性报告：替换 Tac 为待测启动子，通过 mCherry 荧光强度定量启动子活性。
蛋白定位研究：构建 mCherry 融合蛋白，观察目的蛋白在细菌内的定位。
微生物互作 / 体内示踪：标记致病菌或益生菌，追踪其在宿主组织内的分布与定植。
五、使用要点
宿主：优先 E. coli DH5α（克隆）、BL21（表达）；其他革兰氏阴性菌需验证转化效率。
培养：37℃、LB 培养基、50 μg/mL 卡那霉素；mCherry 表达无需诱导（Tac 组成型），加 0.1–1 mM IPTG 可增强表达。
荧光观察：激发 550–590 nm，发射 600–650 nm；荧光显微镜、共聚焦显微镜或活体成像仪均可检测。
六、优缺点总结
优点
✅ 广宿主：适用绝大多数革兰氏阴性菌。
✅ 强表达：Tac 启动子驱动，mCherry 亮度高、成熟快。
✅ 稳定：中高拷贝、结构紧凑、不易丢失。
✅ 易用：卡那霉素筛选、荧光直观、无毒性。
缺点
❌ 原核专用：不适合革兰氏阳性菌或真核细胞。
❌ 无诱导严谨性：Tac 本底表达较高，需严格调控时需改用更严谨启动子。
七、总结
pBBR1MCS2‑Tac‑mCherry 是微生物荧光标记的 “黄金工具”：广宿主、强表达、稳定易用，特别适合革兰氏阴性菌的活细胞示踪、蛋白定位、启动子报告等实验。
