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| 产品货号 | 产品类型 | 装载载体 | 基因信息 | 产品价格 | 出货周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| 报告基因：luxCDABE质粒 | pCS26 | pCS26( 报告基因：luxCDABE) | 680 |
pCS26 是加拿大 McMaster 大学 Surette 实验室开发的低拷贝、模块化 lux 荧光报告质粒，核心用于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、沙门氏菌）的基因表达与体内外成像，广泛用于微生物学与合成生物学研究。
一、基本骨架与元件
骨架大小：约 9.36 kb（不含插入片段）
复制子：低拷贝（严谨型），稳定、低毒性
抗性标记：默认卡那霉素抗性（Kanᵣ，50 μg/mL），也有氯霉素抗性（Cmᵣ）版本
报告基因：luxCDABE（发光杆菌 Photorhabdus luminescens 来源），无需外源底物，自主发光（490 nm），灵敏度高、背景低
多克隆位点（MCS）
启动子插入：XhoI/BamHI（σ⁷⁰依赖型组成型启动子）
报告基因替换：NotI/NotI（可换 mCherry/GFP 等）
下游整合：PacI（用于 mini‑Tn7 转座系统）
二、模块化设计（核心优势）
启动子模块：自带不同强度的σ⁷⁰组成型启动子；也可克隆待测启动子，发光强度直接反映启动子活性。
报告基因模块：基础版为luxCDABE；可替换为 mCherry（红）、GFP（绿），满足多色标记与共定位。
抗性模块：Kanᵣ或 Cmᵣ可选，适配不同宿主与筛选体系。
转座兼容：PacI 酶切后可插入 mini‑Tn7 载体，单拷贝整合至细菌染色体，质粒丢失风险低，适合动物体内实验。
三、常用衍生质粒（Addgene 可购）
pCS‑PluxIlux（#47641）：含费氏弧菌 luxI 启动子，用于群体感应（QS）研究。
pCS‑PesaRlux（#47640）：含欧文氏菌 esaR 启动子，用于细菌‑植物互作。
四、主要应用
基因表达定量：启动子‑lux 融合，发光强度 = 转录活性，实时、无创、高灵敏。
细菌体内成像：lux 标记菌株，活体动物（小鼠 / 鱼类）无创追踪感染与定殖。
启动子筛选与表征：克隆未知启动子，快速评估强度与调控。
合成生物学线路测试：构建基因回路，通过发光动态监测线路功能。
五、使用要点
宿主：大肠杆菌（DH5α、BW25113）、沙门氏菌等革兰氏阴性菌；37°C 培养。
筛选：Kanamycin 50 μg/mL（默认）。
检测：发光检测仪 / 活体成像系统，无需底物、实时检测。
稳定性：低拷贝 + 可转座整合，体外 / 体内稳定性好。
六、优势与局限
优势：自主发光、高灵敏、低背景、模块化、稳定；适配体外实验与体内成像。
局限：仅适用于革兰氏阴性菌；lux 表达有一定代谢负担；发光信号弱于荧光蛋白。
要不要我把 pCS26 的关键元件（启动子、抗性、报告基因、酶切位点）整理成一页可直接参考的实验清单？
pCS26质粒的发光原理是什么？
pCS26 质粒发光原理
pCS26 携带luxCDABE 完整操纵子，来源于发光杆菌，细菌可自主生物发光，无需外加底物，属于细菌荧光素酶生物发光体系。
一、各基因功能（luxCDABE 五个顺反子）
luxA + luxB：编码荧光素酶异二聚体（催化核心酶）
luxC + luxD + luxE：编码脂肪酸还原酶复合物，负责内源合成发光底物
二、完整生化反应分两步
1. 胞内合成发光底物
luxCDE 复合体以细菌体内的长链脂肪酸为原料，连续催化反应，生成：
十四醛（荧光素底物，\(R-(CH_2)_{12}-CHO\)）
全程利用胞内代谢物，不需要人工添加底物。
2. 荧光素酶催化发光反应
在氧气、还原型黄素单核苷酸（\(FMNH_2\)）参与下，luxAB 催化底物氧化：
\(\boldsymbol{FMNH_2 + O_2 + R-(CH_2)_{12}-CHO \xrightarrow{luxAB} FMN + R-(CH_2)_{12}-COOH + H_2O + \textbf{光}}\)
发射波长：~490 nm 蓝绿色光
能量来源：化学反应释放能量直接激发光子，不是荧光（无需激发光），属于生物发光。
三、结合 pCS26 质粒的表达调控
质粒上待测启动子驱动整个 luxCDABE 操纵子转录翻译；
启动子活性越强 → lux 蛋白表达量越高 → 底物合成 + 酶促反应越强 → 发光亮度越高；
因此发光强度可直接定量反映启动子转录活性，也是该质粒用于报告基因实验的核心逻辑。
四、关键特点
区别于 GFP / 荧光蛋白：无激发光、无自发荧光背景，适合活体成像、高通量检测；
依赖有氧环境：厌氧条件下几乎不发光；
受温度影响：37 ℃ 为常规菌适宜温度，温度过高会降低酶活性、减弱发光。
