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| 产品货号 | 产品类型 | 装载载体 | 基因信息 | 产品价格 | 出货周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| GSR000277 | 植物表达载体 | pCAMBIA1300-35S-OsPHT4;6-1-mRFP | pCAMBIA1300-35S-OsPHT4;6-1-mRFP | 480 | 现货 |
pCAMBIA1300-35S-OsPHT4;6-1-mRFP
骨架载体：pCAMBIA1300（植物双元表达载体）
启动子：CaMV 35S（组成型强启动子）
目的基因：OsPHT4;6-1（水稻磷酸盐转运蛋白 PHT4 家族成员）
融合标签：mRFP（红色荧光蛋白，C 端融合）
筛选标记：
原核：Kanamycin（卡那霉素）
植物：Hygromycin B（潮霉素 B）
主要用途：水稻 / 植物中 OsPHT4;6-1 蛋白的亚细胞定位与功能研究
pCAMBIA1300质粒图谱
二、OsPHT4;6-1 基因功能
基因家族：水稻PHT4（Phosphate Transporter 4）亚家族，共 7 个成员（OsPHT4;1～4;6）。
蛋白定位：高尔基体（Golgi apparatus），呈点状荧光信号。
核心功能：高尔基体膜上的磷酸盐转运蛋白，负责细胞内磷素稳态与分配，影响生长发育、衰老及抗病性。
同源关系：拟南芥AtPHT4;6的水稻同源基因，功能保守。
三、载体元件与结构
T-DNA 区域（植物转化）
RB：右边界
35S 启动子→OsPHT4;6-1 CDS→mRFP→NOS 终止子
HygR：潮霉素抗性（植物筛选）
LB：左边界
原核复制与筛选
pVS1 oriV：农杆菌中稳定复制
ColE1 ori：大肠杆菌中高拷贝复制
KanR：卡那霉素抗性（细菌筛选）
四、实验应用场景
亚细胞定位：瞬时转化水稻原生质体或烟草叶片，mRFP 红色荧光示踪 OsPHT4;6-1 在高尔基体的分布。
过表达功能验证：农杆菌介导转化水稻，35S 驱动 OsPHT4;6-1 组成型过表达，分析磷吸收、生长表型及抗逆性。
共定位与互作：与高尔基体 marker（如 ST-GFP）共表达，验证蛋白共定位或相互作用。
五、构建与使用要点
克隆策略：**OsPHT4;6-1 全长 CDS（无终止密码子）** 插入 pCAMBIA1300-35S-mRFP 的 MCS，C 端与 mRFP 融合，保证读码框正确。
宿主菌株：
克隆：DH5α（大肠杆菌，Kan 筛选）
转化：LBA4404/EHA105（农杆菌，Kan + 利福平筛选）
检测方法：
荧光观察：共聚焦显微镜（Ex=587 nm，Em=602–652 nm）
分子鉴定：PCR、酶切、测序、Western blot（抗 mRFP 抗体）
六、参考信息
原始文献：Functional Analysis of Phosphate Transporter OsPHT4 Family Members in Rice（Rice Science, 2020）
骨架载体：pCAMBIA1300（AB275754，Abcam）
替代标签：可换为GFP/EYFP，构建pCAMBIA1300-35S-OsPHT4;6-1-GFP用于绿色荧光定位。
需要我补充该质粒的完整酶切位点与测序引物清单吗？
pCAMBIA1300-35S-OsPHT4;6-1-mRFP载体图谱
下面先给出pCAMBIA1300-35S-OsPHT4;6-1-mRFP的完整环状图谱（文字版 + 元件定位），再附空载体 pCAMBIA1300 参考图，方便你直接画质粒图或做酶切 / 测序设计。
一、载体基本信息
名称：pCAMBIA1300-35S-OsPHT4;6-1-mRFP
骨架：pCAMBIA1300（8958 bp）
插入片段：35S promoter + OsPHT4;6-1 CDS + mRFP + NOS terminator
全长：约 11.3 kb
抗性：
细菌：Kanamycin（KanR）
植物：Hygromycin B（HygR）
二、环状图谱（顺时针，元件 + 大致位置）
以 pCAMBIA1300 原点为 1 位，顺时针排列：
1–250 bp：RB（T-DNA 右边界）
250–800 bp：CaMV 35S promoter（增强型） —— 驱动OsPHT4;6-1
800–2000 bp：OsPHT4;6-1 CDS（水稻磷酸盐转运蛋白，无终止密码子）
2000–2700 bp：mRFP（红色荧光蛋白，C 端融合）
2700–3000 bp：NOS terminator（终止转录）
3000–4500 bp：HygR（潮霉素抗性） + CaMV poly (A)（植物筛选）
4500–5200 bp：pVS1 oriV / RepA / StaA（农杆菌复制 & 稳定）
5200–5800 bp：ColE1 ori / bom（大肠杆菌高拷贝）
5800–6500 bp：KanR（卡那霉素抗性）（细菌筛选）
6500–8958 bp：LB（T-DNA 左边界） + M13 fwd/rev、lac 等辅助元件
T-DNA 区（RB→LB）：35S-OsPHT4;6-1-mRFP-NOS + HygR
骨架区：复制子 + 细菌抗性 + 农杆菌稳定元件
三、T-DNA 区精细结构（表达盒）
plaintext
RB
│
└─── CaMV 35S (enhanced) → OsPHT4;6-1 → mRFP → NOS ter
│
└─── 35S → HygR → CaMV poly(A)
│
LB
融合方式：OsPHT4;6-1（无 stop）–mRFP，读码框连续，表达OsPHT4;6-1-mRFP 融合蛋白
定位用途：mRFP 红色荧光示踪（高尔基体定位）
四、酶切位点（常用，在多克隆位点 / 插入区）
35S 与基因之间：BamHI / KpnI
基因与 mRFP 之间：XhoI / SalI
mRFP 下游：SacI / EcoRI
骨架 MCS：EcoRI, SacI, KpnI, BamHI, XbaI, SalI, PstI, HindIII
