16318hGFP 构建费用500元/个起

基本信息

质粒图谱和多克隆位点信息

注意：

客户在我公司选择构建载体服务项目时，请自行提供母源载体。

如要使用本公司保存的母源载体时，本公司不能保证所有母源载体完全符合客户预期，也不承担由此产生的任何责任。

载体描述

16318-hGFP为植物荧光表达载体，双35S启动子，高效表达融合蛋白GFP，多用于植物亚细胞定位实验。

载体序列 CCAGTGCCAAGCTAATTCGAGCTCGGTACCCCTACTCCAAAAATGTCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATTTCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCGAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCATTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGACATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACCCCTACTCCAAAAATGTCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATTTCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCGAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCTCCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCATTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGACATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGACAGCCCAAGCTTGCATGCCTGCAGGTCGACGATATCTCTAGAGGATCCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCTTCACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCACGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAACCCGGGAATTCGGTACGCTGAAATCACCAGTCTCTCTCTACAAATCTATCTCTCTCTATTTTCTCCATAAATAATGTGTGAGTAGTTTCCCGATAAGGGAAATTAGGGTTCTTATAGGGTTTCGCTCATGTGTTGAGCATATAAGAAACCCTTAGTATGTATTTGTATTTGTAAAATACTTCTATCAATAAAATTTCTAATTCCTAAAACCAAAATCCAGTACTAAAATCCAGATCTCCTAAAGTCCCTATAGATCTTTGTCGTGAATATAAACCAGACACGAGACGACTAAACCTGGAGCCCAGACGCCGTTCGAAGCTAGAAGTACCGCTTAGGCAGGAGGCCGTTAGGGAAAAGATGCTAAGGCAGGGTTGGTTACGTTGACTCCCCCGTAGGTTTGGTTTAAATATGATGAAGTGGACGGAAGGAAGGAGGAAGACAAGGAAGGATAAGGTTGCAGGCCCTGTGCAAGGTAAGAAGATGGAAATTTGATAGAGGTACGCTACTATACTTATACTATACGCTAAGGGAATGCTTGTATTTATACCCTATACCCCCTAATAACCCCTTATCAATTTAAGAAATAATCCGCATAAGCCCCCGCTTAAAAATTGGTATCAGAGCCATGAATAGGTCTATGACCAAAACTCAAGAGGATAAAACCTCACCAAAATACGAAAGAGTTCTTAACTCTAAAGATAAAAGATCTTTCAAGATCAAAACTAGTTCCCTCACACCGGTGACGGGGATCGCATGCGATATCTCGAGATCTAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTG

16318hGFP质粒（植物亚细胞定位专用）

一、质粒核心基础信息

1.  质粒名称：16318hGFP（全称为p16318-35S-hGFP，部分文献简写为16318-hGFP）

2.  核心元件：CaMV 35S强启动子（驱动目的基因与GFP融合表达）、hGFP（人源化绿色荧光蛋白，荧光强度高于普通GFP，观察更清晰）、多克隆位点（MCS，便于插入目的基因）、筛选抗性基因（卡那霉素Kan⁺）

3.  载体骨架：p16318系列专用骨架，属于植物瞬时表达载体，无稳定转化筛选元件（主要用于瞬时表达定位）

4.  融合方式：支持目的基因与hGFP进行N端或C端融合（常规为C端融合，不影响目的蛋白空间构象）

5.  质粒大小：约5.8-6.2 kb（不同实验室构建版本略有差异，核心元件一致）

二、应用场景（重点适配植物研究）

1.  植物原生质体瞬时表达定位：这是16318hGFP最核心的应用场景，适配拟南芥、小麦、木薯等多种植物的原生质体转化，表达效率高，荧光信号强，可快速观察目的蛋白的亚细胞定位情况。

2.  目的基因亚细胞定位验证：将目的基因CDS全长克隆至该质粒的多克隆位点，构建重组载体（如16318hGFP-TaSRP、16318-MeNRT2.6-hGFP），通过原生质体瞬时转染，结合激光共聚焦显微镜观察荧光信号位置，明确目的蛋白在细胞内的分布（如细胞质、细胞器等）。

3.  辅助验证蛋白功能：在植物抗逆、氮素利用等相关研究中，可结合该质粒的定位结果，辅助分析目的蛋白（如TaSRP、MeNRT2.6）的功能机制，为后续基因功能鉴定提供基础。

4.  不适用于：植物稳定遗传转化（无对应的稳定筛选元件）、农杆菌介导的烟草叶片瞬时侵染（表达效率低于pBI121、pCAMBIA系列载体）。

三、关键实验参数（直接照用）

1.  筛选抗性：卡那霉素（Kan），筛选浓度为50-100 μg/mL（大肠杆菌扩增）、30-50 μg/mL（植物原生质体筛选，可选）

2.  宿主菌：大肠杆菌DH5α（用于质粒克隆、扩增），农杆菌不适用（该载体无农杆菌复制起点）

3.  转化方法：原生质体采用PEG介导转化，大肠杆菌采用热激转化

4.  观察时间：原生质体转染后，室温弱光孵育16-24 h（或黑暗培养16 h），即可通过激光共聚焦显微镜观察荧光信号（激发波长488 nm，发射波长507 nm）