Co-IP 截断体,质粒构建

Co-IP 截断体,质粒构建 Co-IP 截短体,质粒构建案例

1. 实验体系说明

这是免疫共沉淀（Co-IP） 实验，用来定位 GCA 与 Plexin B2 相互作用的关键氨基酸区段

• 固定诱饵蛋白：HA-Plexin B2（所有组别均共转，+）

• 猎物蛋白：一系列 Myc 标签的 GCA 分段截短突变体：

• Myc-GCA △1-47

• Myc-GCA △48-83

• Myc-GCA △89-122

• Myc-GCA △119-154

• Myc-GCA △155-180

• Myc-GCA △181-217

+ = 本组转染该质粒；- = 不转染

实验流程：

IP:HA → 使用抗 HA 抗体抓取 HA-Plexin B2 复合物，随后用 IB:Myc 检测共沉淀下来的 GCA 截短体，判断二者能否结合。

2. 结果判读（Western blot 条带）

• 下方胶：IP:HA（Plexin B2），各组条带亮度均一，证明每组 Plexin B2 富集量一致，上样无偏差。

• 上方胶：IB:Myc（检测被 Plexin B2 拉下来的 GCA）

1. Myc-GCA △1-47：有清晰条带 → 该片段可以结合 Plexin B2

2. Myc-GCA △48-83：无明显条带 → 该片段无法结合

3. Myc-GCA △89-122：无明显条带 → 该片段无法结合

4. Myc-GCA △119-154：有清晰条带 → 该片段可以结合 Plexin B2

5. Myc-GCA △155-180：条带极弱 / 无 → 几乎不结合

6. Myc-GCA △181-217：无条带 → 无法结合

3. 实验结论

✅ GCA 与 Plexin B2 的互作区域位于两段：氨基酸 1–47 以及 119–154；

其余区段（48–83、89–122、155–180、181–217）单独存在时不能和 Plexin B2 发生相互作用。